产品介绍
产品介绍
Human-derived cardiac organoid differentiation induction kit（人源心脏类器官分化诱导试剂盒）是一款用于从人多功能干细胞诱导分化心脏类器官的试剂盒。该试剂盒一套可以诱导50个心脏类器官。从第7-10天开始可以看到存在空腔并出现自主跳动，具有心脏的一定特性。诱导的心脏类器官可用于心脏相关的疾病模型建立，药物效果测定以及药物心毒副用筛选等。
产品信息
心脏类器官基础培养基
120ml，4℃，12个月
心脏类器官Supplement A
200ul，-20℃，6个月，避免反复冻融
心脏类器官Supplement B
800ul，-20℃，6个月，避免反复冻融
心脏类器官Supplement C
400ul，-20℃，6个月，避免反复冻融
心脏类器官Supplement D
1ml，-20℃，6个月，避免反复冻融
另需准备试剂及耗材
Y-27632
干细胞培养基（mTeSR™1或者mTeSR™ Plus或者TeSR™-E8™）
D-PBS（无钙镁）
细胞解离液（Accutase）
96孔U型超低吸附板
心脏类器官构建
预准备
心脏类器官A培养基：心脏类器官基础培养基 9.8ml+心脏类器官Supplement A 200ul
心脏类器官B培养基：心脏类器官基础培养基 39.2ml+心脏类器官Supplement B 800ul
心脏类器官C培养基：心脏类器官基础培养基 19.6ml+ 心脏类器官Supplement C 400ul
心脏类器官D培养基：心脏类器官基础培养基 49ml+心脏类器官Supplement D 1ml
心脏类器官构建的阶段
1. 干细胞接种（Day0）
2. 中胚层诱导（Day2-4）
3. 心肌细胞诱导生成（Day4-8）
4. 心脏类器官基础构建（Day8-10）
5. 心脏类器官的维持与培养（Day10-30）
心脏类器官诱导
Day0：待干细胞生长到80-90%左右，吸取培养基，加入1ml用无钙镁的D-PBS清洗一遍，加入细胞解离液，37度培养箱孵育5min，加入干细胞培养基终止，使用移液管或1m移液枪上下吹打单细胞悬液，完成细胞计数。使用干细胞培养基将细胞悬液稀释至1x105cell/ml密度，补充10uM Y-27632，使用移液枪充分混匀。将细胞悬液以100ul/孔加入96孔U型超低吸附板，确保每孔细胞量在1x104cell。300g离心5min，使细胞聚集在U型培养板板底。
Day1：使用移液枪小心吸弃96孔U型超低吸附板内培养液，切勿损伤底部聚集体，后加入干细胞培养基200μL/孔;
Day2：使用移液枪小心吸弃96孔U型超低吸附板内的干细胞培养基，切勿损伤底部聚集体，每孔加入200ul心脏类器官A培养基;
Day4：使用移液枪小心吸弃96孔U型超低吸附板内的心脏类器官A培养基，切勿损伤底部聚集体，每孔加入200ul心脏类器官B培养基, 每天换液，连续4天;
Day8：使用移液枪小心吸弃96孔U型超低吸附板内的心脏类器官B培养基，切勿损伤底部聚集体，每孔加入200ul心脏类器官C培养基, 每天换液，连续2天;
Day10：使用移液枪小心吸弃96孔U型超低吸附板内的心脏类器官C培养基，切勿损伤底部聚集体，每孔加入200ul心脏类器官D培养基, 每1-2天换1次液,持续培养;
注：一般在第8-12天的时候可以观察到存在空腔并出现跳动，若无出现跳动适当延长时间。
