慢病毒载体（LENTIVIRAL VECTOR, LVS）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效将目的基因（或RNAI）导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录MRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生RNAI干扰。

慢病毒载体介导的基因表达或RNAI干扰作用持续且稳定，原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中，并随细胞基因组的分裂而分裂。另外，慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比，比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体，有鲜明的特色。大量文献研究表明，慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等，又很少引发机体免疫反应，能达到良好的基因治疗效果，具有广阔的应用前景。已成为国际上最通用的转染系统之一，广泛用于各类实验室。

我司采用的慢病毒载体属于“第三代”慢病毒载体，其基因组的3’LTR的增强子功能发生了缺失，从而形成了所谓的“自灭活”（SELF-INACTIVATION，SIN），即该病毒基因组整合到细胞基因组后，不会产生新的子代病毒，也降低了对周围基因的意外激活，因此具有较好的安全性。

我司慢病毒载体系统由表达载体PLENTI-GENE、包装辅助载体PGAG/POL和PREV、包膜载体PVSV-G四质粒组成。可以根据实验目的采用不同的表达载体PLENTI-GENE，如基因表达研究采用PLV-GENE、RNA 干扰采用PLV-U6等进行研究。PGAG/POL载体中含有HIV 病毒的GAG 基因，编码病毒主要的结构蛋白；POL 基因，编码病毒特异性的酶；PREV 载体编码REV 基因，是调节GAG 和POL 基因表达的调节因子。PVSV-G载体中含有单纯疱疹病毒来源的VSV-G 基因，提供病毒包装所需要的包膜蛋白。

• 1、含目的基因的载体质粒PLV-GENE的构建和纯化提取；
• 2、PLV-GENE、PGAG/POL、PREV、PVSV-G四质粒共转染293T细胞包装病毒；
• 3、培养48~72H，收集培养含病毒上清；
• 4、慢病毒载体的纯化和浓缩（超离和/或超滤）；
• 5、分装、-80℃保存；
• 6、滴度测定、目的基因检测；
• 7、感染目的细胞；稳定细胞株构建。